Resumo: Isolation, expansion and differentiation of cellular progenitors obtained from dental pulp of agouti (Dasyprocta prymnolopha Wagler, 1831). Este estudo teve como objetivo isolar, expandir, diferenciar e caracterizar células progenitoras existentes na polpa dentária de cutia. O material foi lavado em solução de PBS e dissociado mecanicamente, com o auxílio de uma lâmina de bisturi, em placas contendo meio de cultura D-MEM/F-12, e incubadas em 5% de CO2-37⁰C. A curva de crescimento, o ensaio de CFU, a diferenciação osteogênica/adipogênica e a caracterização foram obtidas a partir do isolamento. As células começaram a ser liberadas, a partir do explante, em torno do sétimo dia de cultura. A partir do 22o dia, as células atingiram 80% de confluência. No teste para UFC, 81 colônias foram contadas aos 12 dias de cultivo. As curvas de crescimento pré- e pós-congelamento apresentaram crescimento regular, com intensa proliferação e potencial clonogênico. A diferenciação das células mostrou a formação de osteoblastos e de células de gordura, a partir de 15 dias de cultura em meio específico. A citometria de fluxo (FACS) apresentou-se como segue: CD34 (positivo), CD14 (negativo), CD45 (negativo), CD73 (positivo), CD79 (negativo), CD90 (positivo), CD105 (positivo), demonstrando a grande especificidade e comprometimento das células isoladas com linhagens de células-tronco mesenquimais. Estes resultados sugerem a existência de uma população de células-tronco mesenquimais isolada a partir de explantes da polpa dentária cutia, um modelo potencial para o estudo de linhagens de células-tronco obtidas a partir do tecido pulpar.

Abstract: The study aimed to isolate, expand, differentiate and characterize progenitor cells existent in the dental pulp of agouti. The material was washed with PBS solution and dissociated mechanically with the aid of a scalpel blade on plates containing culture medium D-MEM/F-12, and incubated at 5% CO2-37⁰C. The growth curve, CFU assay, osteogenic/adipogenic differentiation and characterization were obtained from the isolation. The cells began to be released from the explant tissue around the 7th day of culture. By day 22 of culture, cells reached 80% confluence. At the UFC test, 81 colonies were counted with 12 days of cultivation. The growth curves before and after freezing showed a regular growth with intense proliferation and clonogenic potential. The cell differentiation showed formation of osteoblasts and fat in culture, starting at 15 days of culture in a specific medium. Flow cytometry (FACs) was as follows: CD34 (positive), CD14 (negative), CD45 (negative), CD73 (positive), CD79 (negative), CD90 (positive), CD105 (positive), demonstrating high specificity and commitment of isolated cells with mesenchymal stem cells strains. These results suggest the existence of a cell population of stem cells with mesenchymal features from the isolated tissue in the explants of agouti dental pulp, a potential model for study of stem cell strains obtained from the pulp tissue.

As células-tronco mesenquimais (MSC) estão presentes em nichos especializados nas regiões perivasculares dos tecidos adultos e são capazes de se diferenciar em diversos tipos celulares, dentre eles, os comprometidos com processos de reparação óssea. MSC oriundas da medula óssea de oito camundongos jovens C57BL/6 gfp+ foram expandidas em culturas e utilizadas na reparação de defeitos críticos produzidos em calvária de 24 camundongos isogênicos C57BL/6 adultos. Os animais foram submetidos a um defeito craniano de 6,0mm de diâmetro e separados em dois grupos experimentais iguais. O grupo controle não recebeu tratamento e no grupo tratado foi administrado, no interior do defeito, pellet de MSC contendo 1,0 x 10(7) células/mL. O grupo tratado com MSC exibiu aumento da angiogênese e maior quantidade de novo osso depositado nas bordas do defeito, comparando-se ao grupo controle. Nas condições experimentais apresentadas nesse estudo, constatou-se que o transplante de células-tronco mesenquimais (MSC) derivadas da medula óssea de camundongos C57BL/6 gfp+, aplicadas em defeitos ósseos críticos, produzidos em calvária de camundongos contribui positivamente para o processo de reparação óssea. As MSC apresentam habilidades de influenciar o correto funcionamento dos osteoblastos, aumentar a quantidade de células mobilizadas nos processos de reparação, aumentar a liberação de fatores de crescimento e aumentar a deposição de matriz óssea.

Mesenchymal stem cells (MSC) are present in specialized niches in perivascular regions of adult tissues and are able to differentiate into various cell types, such as those committed to repairing. Bone marrow derived MSC from eight young mice C57BL/ 6 gfp+ were expanded in culture for repairing critical defects in calvarial bone produced in twenty-four young isogenic adult C57BL/6 mice. The animals were subjected to a cranial defect of 6.0mm diameter and divided into two equal experimental groups. Control group did not receive any treatment and the treated group received a MSC pellet containing 1.0 x 10(7) cells/mL into the defects. The group treated with MSC showed increased angiogenesis and amount of new bone deposited on the defect limits than that observed in the control group. The results demonstrated that transplantation of bone marrow-derived MSC of C57BL/6 gfp+ mice to bone critical defects produced in mice calvarial contributes positively to the bone repair process. MSC presets ability to influence the correct functioning of osteoblasts, increases the amount of mobilized cells for the repairing process, speeds up growth, and increases deposition of bone matrix.